建立大鼠脓毒症模型将脂多糖溶于生理盐水,配制成质量浓度为1 gL的溶液,脂多糖组腹腔注射10 mg/kg脂多糖建立大鼠脓毒症模型P10,对照组注射等量的生理盐水。1.4.3指标检测方法对照组腹腔注射生理盐水后6 h,脂多糖各亚组大鼠分别于造模后6,12,24 h相应的时相点,用3 mL/kg体积分数10%水合氯醛腹腔注射麻醉后行超声心动图检查心功能,随后下腔静脉采血并开胸立即摘取心脏放入4℃生理盐水漂洗,沿左心室最大横径冠状切面取左心室心肌组织,进行相关指标检测。
(1)动物一般状况和生存率记录:观察对照组和脂多糖组大鼠的精神状态,记录大鼠生存时间并计算生存率,观察至造模后10 d。
(2)大鼠心功能测定:各组大鼠相应的时相点,水合氯醛腹腔注射麻醉后前胸部备皮,使用vivid 7 pro超声诊断扫描仪,将频率12 MHz超声探头置于胸骨旁左心室长轴切面,M超声模式下测量左室收缩末期内径、左室舒张末期内径,选取3个心动周期测量取平均值,根据Teichholtz公式计算出左室射血分数、左室缩短分数。
(3)鼠心肌酶学指标测定:测定大鼠心功能后立即下腔静脉取血3 mL, 4 ℃下3 0o0 r/min离心5 min制备血清标本。-80℃保存,同批检测。按照大鼠血清心肌肌钙蛋白l、脑钠肽检测试剂盒相关说明操作,酶标仪450 nm波长处测A值,通过绘制标准曲线计算出样品浓度。
(4)心肌组织病理学观察:取各组大鼠的心脏放入4 ℃生理盐水漂洗,沿左心室最大横径冠状切面取左心室心肌组织,置入40 gL多聚甲醛溶液中固定12 h后,脱水、石蜡包埋、切片、苏木精-伊红染色,光学显微镜下观察心肌病理形态结构变化。
(5)透射电镜观察心肌超微结构:取各组大鼠左室心肌组织迅速放入4℃冰戊二醛中固定30 min,然后修成1 mm×1 mm×1 mm大小,置于冰戊二醛中固定2h,然后每隔2h换1次缓冲液,连换3次,梯度乙醇脱水,环氧丙烷浸透、包埋,制作厚度50 nm左右切片,醋酸铀、构椽酸铅染色透射电镜观察心肌组织超微结构。
1.5主要观察指标①大鼠一般状况和生存率:②心功能:画心肌静学指标:心从主外微结构。
1.6统计学分析应用SPSS 22.0软件进行统计学分析。正态分布的计量资料以社s表示,多个样本均数间的比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验:用GraphPad Prism 7.0绘制Kaplan-Meae n为差异有显著性意义。