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来源：未知 |发布时间：2021-05-06 14:43|点击:次
肾切除联合ISO制备心肾综合征大鼠模型方法初探
随着医疗技术发展，心力衰竭与肾脏病患者生存率不断提高，心肾疾病之间的紧密关系逐渐被发现。临床治疗心肾综合征手段有限，利尿与超滤为主要治疗措施。为探索中医药治疗心肾共损状态的作用机制，心肾综合征实验模型不可或缺。
目前常见的造模方法可分为手术法与药物注射法两类，“5/6肾切除术制备心肾综合征大鼠模型”是经典的制备心肾综合征模型方法之一，由肾功能衰竭导致心衰也符合心肾综合征发病机制之一，但通过单一方法制备心肾综合征大鼠模型往往花费时间较长。查阅相关文献，课题组最终选择异丙肾上腺素（ISO）作为本次研究方向，ISO属非选择性β受体激动剂，可显著加快心率，提高心肌收缩力，若是大剂量长时间使用，可直接诱导心肌损伤。
因此课题组选择在肾切除术后低剂量、短时间联用ISO，以达到缩短肾功能衰竭导致心力衰竭自然病程的目的，且不会直接诱导致心肌损伤，该法可较高程度模拟心肾综合征疾病过程。
1材料与方法
1.1主要实验材料
1.1.1动物情况清洁级SD雄性大鼠20只，体质量（150±10）g，均购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
1.1.2耗材与仪器ISO（SIGMA）、戊巴比妥钠、注射用青霉素钠、注射器（1、5、20mL）、注射用水、碘伏、明胶海绵、无菌纱布、毛细采血管、促凝离心管、移液枪（100~1000μL）、10%中性甲醛溶液等。Sunrise全自动酶标仪、HH-4恒温水浴锅、RT-3000自动洗板机、Eppendorf5427R台式高速冷冻离心机等。
1.1.3检测试剂大鼠尿素氮（BUN）酶联免疫吸附（ELISA）检测试剂盒、大鼠脑钠尿肽（BNP）ELISA检测试剂盒、大鼠血肌酐（Cr）ELISA检测试剂盒。
1.2实验方法
1.2.1分组及造模方法将20只雄性SD大鼠随机分为2组，正常组9只，手术组11只，正常组大鼠不做处理，手术组大鼠均按“两次手术法”行5/6肾切除术，手术1周后连续2d（间隔24h）皮下注射异丙肾上腺素（分别为2.5、1.5mg/kg）制备心肾综合征模型：
1）一期手术（左肾2/3切除）：大鼠称体质量并记录后，以2%戊巴比妥钠35mg/kg腹腔注射麻醉。麻醉成功后，将大鼠俯卧位固定在大鼠手术台上，从左侧腹缓慢向背部推及肾脏，确定手术区位置，手术区域备皮、碘伏消毒。距左脊肋角1.5cm处做2cm左右的长切口，再次从腹侧向背侧推挤肾脏，使左肾视野充分暴露。
用镊子钝性分离左肾周围脂肪层，剥离肾包膜、肾上腺及肾蒂，充分游离肾蒂并用血管钳夹闭，再用弯剪分别从左肾上下极弧形切除部分肾组织，共切除2/3左肾，随即使用明胶海绵压迫两侧切口15~20s，松开血管钳并用无菌纱布压迫止血，待无新鲜出血，将剩余肾脏及周围组织还纳体内，明胶海绵无需取出，可自行吸收。缝合前在腹腔内注入青霉素钠8万单位。由内而外逐层缝合肌肉层及皮肤，0.9%氯化钠注射液、碘伏先后清洁切口及手术区域，术后大鼠先单笼饲养并观察生命体征，待大鼠完全苏醒后再放入饲养笼混养。
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