大鼠固定架的使用方法
来源：未知 |发布时间：2021-04-15 16:40|点击:次
电灼伤致创伤性局灶性胰腺炎大鼠固定架模型的构建
临床实践中,胃癌根治性手术需要清扫淋巴结及剥除胰腺被膜,电刀或超声刀的使用易导致创伤性局灶性胰腺炎。胰液含有胰蛋白酶,消化能力强,胰液渗出可导致吻合口漏、腹腔出血等严重情况。为进一步研究创伤性局灶性胰腺炎的发病机制,急需建立成活率高、可复制的疾病动物模型,为此,本研究选取SD大鼠固定架,成功建立创伤性局灶性胰腺炎的动物模型，现报道如下。
1材料与方法
1.1材料
清洁级SD大鼠固定架[由南通大学动物实验中心提供，生产许可证号: SYXK(苏)2015-0016]30只,体质量200~ 250 g, 雄性。淀粉酶(AMS)、磷脂酶A2(PLA2)的酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒,高频电刀(ConmedSys-tem 5000)。
1.2 方法
1.2.1 手术方法
将大鼠固定架随机分为,对照组和建模组,各15只。具体操作:手术前12 h禁食水,备皮,采用10%水合氯醛(0.3mL/100g)经大鼠固定架腹腔注射麻醉,麻醉成功后,消毒、剖腹并解剖出胰腺组织，建模组使用高频电刀(模式:bipolar,功率:5 W)电凝胰腺被膜0.1 s,致靠近被膜的胰腺组织颜色发白,大鼠固定架胰腺与人类的胰腺器官不同,广泛分布于大鼠固定架肠系膜中,术中选取胰腺组织较为集中的区域(胃后方近脾门处),灼伤面积约1 cmX1 cm,复位胰腺后逐层縫合关腹。对照组仅翻动胰腺后复位,其余操作同建模组。术中注意补液,将2 mL/100 g的生理盐水皮下注射。术后注意保暖,使用棉布包裹大鼠固定架。
1.2.2 取材
在术后24、72h和7d3个时间点解剖两组大鼠固定架，每组每个时间点解剖5只大鼠固定架,采集血清、腹腔积液及胰腺组织并合理保存标本。
1.2.3 观察指标
(1)一般状况:手术过程中观察实验动物的一般状况,监测其术后精神状态、进食、排便的变化。(2)血清和腹腔积液AMS.PLA2:每组3个时间点应用AMS、PLA2的ELISA试剂盒进行检测。(3)大体观察和病理检查:在3个时间点,观察腹腔积液量、胰腺及胰周组织情况,切取胰腺组织制作病理切片并进行HE染色和镜下观察。
1.3 统计学处理
采用SPSS20. 0统计软件进行数据分析,正态分布的计量资料以x士s表示,组间比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1手术情况及术后一般状况
麻醉诱导3min后,大鼠固定架角膜反射、肌腱反射消失,自主呼吸平稳,因操作简单,整个建模时间大约20min,麻醉诱导后2h左右大鼠固定架开始苏醒,对照组和建模组无明显差异。建模组大鼠固定架术后精神状态较对照组差,术后活动量较少,觅食行为延迟,排便延后且排便量减少。
2.2大体观察
建模组术后24 h腹腔积液(淡黄色)量达高峰,术后72h腹腔积液较之前减少,术后7d腹腔积液明显减少,见表1。建模组胰腺组织有充血、水肿、局部坏死表现,与周围组织粘连明显，周围渗出明显;对照组未见明显异常。
2.3血清和腹腔积液AMS、PLA2的测定
术后72 h,建模组大鼠固定架血清AMS水平明显高于对照组[ (70.94士4.78)U/L vs. (57. 47士4.33)U/L,P<0.01];而术后24 h,建模组大鼠固定架血清AMS水平[(60.14士3. 87)U/L]与对照组[(56.91士4. 08)U/L]比较差异无统计学意义(P>0.05),术后7 d,建模组大鼠固定架血清AMS水平[(58.19士2.96)U/L]与对照组[(56.96士5.26)U/L]比较差异无统计学意义(P>0.05)。建模组大鼠固定架腹腔积液AMS水平在术后24 h[(154. 73士7. 65)U/L vs. (31. 77士2.85)U/L,P<0.01]、术后72 h[(125. 27士8.34)U/L us.(32.28士4.62)U/L,P<0. 01]、术后7 d[(103. 53士10.56)U/L vs. (31.26士4.13)U/L,P<0.01]均明显高于对照组。建模组大鼠固定架术后24 h血清PLA2水平[(7.18士0.68)ng/ mL]高于对照组[(6.80士0.50)ng/mL,P<0.05];建模组大鼠固定架术后72 h血清PLA2水平[(6.88土0. 67) ng/mL]与对照组[(6.96士0.35)ng/mL]比较差异无统计学意义(P>0.05);建模组大鼠固定架术后7 d血清PLA2水平[(7. 4士0.76)ng/mL]与对照组[(6.94士0.36)ng/mL]比较差异无统计学意义(P>0.05),建模组大鼠固定架腹腔积液PLA2水平在术后24 h[(12. 38士0.82)ng/mL Us. (7. 74士0.52)ng/mL,P<0.01]、术后72 h[(11. 28士0. 71)ng/mL vs. (7. 40士0.58) ng/mL, .P<0.01]、术后7 d[(11.88士0.59) ng/ mLUS.(7. 18土0.84)ng/mL,P<0.01]均明显高于对照组。
临床实践中,胃癌根治性手术需要清扫淋巴结及剥除胰腺被膜,电刀或超声刀的使用易导致创伤性局灶性胰腺炎。胰液含有胰蛋白酶,消化能力强,胰液渗出可导致吻合口漏、腹腔出血等严重情况。为进一步研究创伤性局灶性胰腺炎的发病机制,急需建立成活率高、可复制的疾病动物模型,为此,本研究选取SD大鼠固定架,成功建立创伤性局灶性胰腺炎的动物模型，现报道如下。
1.1材料
清洁级SD大鼠固定架[由南通大学动物实验中心提供，生产许可证号: SYXK(苏)2015-0016]30只,体质量200~ 250 g, 雄性。淀粉酶(AMS)、磷脂酶A2(PLA2)的酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒,高频电刀(ConmedSys-tem 5000)。
1.2 方法
1.2.1 手术方法
将大鼠固定架随机分为,对照组和建模组,各15只。具体操作:手术前12 h禁食水,备皮,采用10%水合氯醛(0.3mL/100g)经大鼠固定架腹腔注射麻醉,麻醉成功后,消毒、剖腹并解剖出胰腺组织，建模组使用高频电刀(模式:bipolar,功率:5 W)电凝胰腺被膜0.1 s,致靠近被膜的胰腺组织颜色发白,大鼠固定架胰腺与人类的胰腺器官不同,广泛分布于大鼠固定架肠系膜中,术中选取胰腺组织较为集中的区域(胃后方近脾门处),灼伤面积约1 cmX1 cm,复位胰腺后逐层縫合关腹。对照组仅翻动胰腺后复位,其余操作同建模组。术中注意补液,将2 mL/100 g的生理盐水皮下注射。术后注意保暖,使用棉布包裹大鼠固定架。
1.2.2 取材
在术后24、72h和7d3个时间点解剖两组大鼠固定架，每组每个时间点解剖5只大鼠固定架,采集血清、腹腔积液及胰腺组织并合理保存标本。
1.2.3 观察指标
(1)一般状况:手术过程中观察实验动物的一般状况,监测其术后精神状态、进食、排便的变化。(2)血清和腹腔积液AMS.PLA2:每组3个时间点应用AMS、PLA2的ELISA试剂盒进行检测。(3)大体观察和病理检查:在3个时间点,观察腹腔积液量、胰腺及胰周组织情况,切取胰腺组织制作病理切片并进行HE染色和镜下观察。
1.3 统计学处理
采用SPSS20. 0统计软件进行数据分析,正态分布的计量资料以x士s表示,组间比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1手术情况及术后一般状况
麻醉诱导3min后,大鼠固定架角膜反射、肌腱反射消失,自主呼吸平稳,因操作简单,整个建模时间大约20min,麻醉诱导后2h左右大鼠固定架开始苏醒,对照组和建模组无明显差异。建模组大鼠固定架术后精神状态较对照组差,术后活动量较少,觅食行为延迟,排便延后且排便量减少。
2.2大体观察
建模组术后24 h腹腔积液(淡黄色)量达高峰,术后72h腹腔积液较之前减少,术后7d腹腔积液明显减少,见表1。建模组胰腺组织有充血、水肿、局部坏死表现,与周围组织粘连明显，周围渗出明显;对照组未见明显异常。
2.3血清和腹腔积液AMS、PLA2的测定
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