小鼠固定架的临床使用
来源：未知 |发布时间：2021-04-13 11:18|点击:次
I型单纯疱疹病毒致带状疱疹后神经痛小鼠固定架模型的建立
带状疱疹后神经痛(PHN)是带状疱疹皮损愈合后遗留的顽固性神经病理性疼痛，是带状疱疹最常见的并发症之一。
流行病学调查资料显示，约有20%的带状疱疹患者在发病后3个月报告有PHN发生,且发生率随年龄增长而升高,60岁以上老年患者发生率高达50%~75%。
PHN一旦形成,由于疼痛往往较为剧烈,且病程长,患者多伴有焦虑和抑郁等精神症状,严重影响患者生活质量。目前临床上治疗PHN的方法主要分为药物疗法和非药物疗法。治疗药物主要有抗抑郁药、抗癫痫药、镇痛药等,需要长期甚至终身服药,且不良反应较多。非药物疗法如脊髓电刺激、神经阻滞与毁损、皮内注药疗法等,有严重并发症的可能,且部分疗法因临床患者个体差异而导致安全性和有效性不尽人意。
因此,明确PHN的病理过程及发病机制,积极探讨有效的预防和治疗措施,降低发病率,找到疗效确切、不良反应少、安全系数高的新型治疗手段以快速有效地缓解患者疼痛具有十分重要的意义。本研究旨在建立PHN动物模型,并通过对照研究观察在不同时间点动物机械痛和热痛的具体测量指标的变化,以检验动物模型的建立是否成功。
1材料与方法
1.1实验试剂和仪器
NE-PER蛋白提取试剂盒,抗Na1. 3鼠单克隆抗体,抗Na1.3鼠单克隆抗体,抗β-Actin鼠单克隆抗体,BECK-MANDU800紫外分光光度计、电泳槽、Odyssey红外成像系统。
1.2 方法
1.2.1PHN动物模型的制作
选择SPF级8周龄雄性C57小鼠固定架30只,体重18~22 g,由上海中医药大学动物中心提供,合格证号SCXK(沪)2003-0003。将其随机分为3组,分别为空白组、实验组、对照组,每组10只。
所有动物腹腔内注射1%戊巴比妥钠溶液50 mg/kg麻醉后,将左下肢和背部用化学脱毛剂脱毛并用清水冲洗脱毛部位。3d后，选取脱毛区光滑无损伤动物进人以下实验,皮肤损伤的动物剔除,以同等数量的动物补齐。
实验组分别于每只动物左下肢胫骨局部处用微量加样器皮下接种I型单纯疱疹病毒(HSV-I )10μL(浓度为1X10oPFU/mL)。对照组以同等剂量灭活的HSV-I进行接种,空白组在相应部位注射同等剂量的生理盐水。观察3组接种前至接种后7d小鼠固定架有无皮肤变化,于接种前和接种后第1.3.5.7天测定后爪机械痛阈和热痛痛阈反应评分。
1.2.2行为学 测试.
1.2.2.1 机械痛阈值测量
在造模前(T。)和造模后1 d(T) 、3d(T2) 、5 d(Tz)、7 d(T,)用von Frey纤维丝测定小鼠固定架机械缩足反应阈值(MWT)。将小鼠固定架随机置于鼠笼内,底面积为1 cmX1 cm孔径的铁丝网，待小鼠固定架在笼中适应30 min后,以不同力度的von Frey 纤维细丝垂直刺激小鼠固定架双侧足底,持续1~3 s,出现抬足或舔足行为为阳性反应,否则为阴性反应。连续测定5次,每次间隔10s,测量5次中有3次出现阳性反应记为阳性结果,左右两侧平均值为小鼠固定架最终MWT。
1.2.2.2热痛阈值(TWL)测量在造模前(T。)和造模后1 d(Tp) 、3 d(T2) 、5 d(T3)、7 d(T:)将各组小鼠固定架依次置于热痛阈检测盒中,待其安静后,打开辐射光源，依次在其足趾与足掌上选择3个照射点,每个间距0.2cm,每次照射间隔时间3min。当小鼠固定架出现嘶吼、舔足、甩尾及弹腿任一行为时记录所需照射的时间。3个照射点的平均值为小鼠固定架最终TWL。每次照射时间均不能大于30 s,以防止热烫伤。
1.3 统计学处理 采用SPSS19.0软件对数据进行分析处理,计量资料以x士s表示，多组间相互比较采用单因素方差分析,两两比较采用t检验,P<0. 05为差异有统计学意义。
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