小鼠固定器的临床使用
来源：未知 |发布时间：2021-05-07 16:27|点击:次
球形马拉色菌过增殖特应性皮炎小鼠固定器模型的建立
特应性皮炎(atopicde珊atitis，AD)是一种与遗传过敏素质有关的慢性复发性、炎症性、瘙痒性皮肤病，主要与遗传易感性、免疫炎症反应、环境因素、皮肤屏障功能障碍及皮肤表面微生态失调等有关。近年来研究显示，AD患者皮肤微生态的菌群种类呈多样化，其中真菌菌群的分布存在个体差异，嗜脂性马拉色菌是最常见的分离菌群。
且球形马拉色菌和限制马拉色菌为AD患者的优势菌。有研究显示马拉色菌定植数量与AD病情严重程度呈正相关HJ。马拉色菌与AD宿主交互作用机制尚未完全明确，目前稳定有效的马拉色菌过增殖动物模型的缺乏极大地阻碍了相关研究进展。本研究拟通过MC903涂布法建立BALB/c小鼠AD模型，进而涂布球形马拉色菌液以建立小鼠固定器皮肤真菌过增殖模型，为模拟马拉色菌在皮肤粘附、定植和加重AD的过程提供动物模型，为深入研究皮肤微生态与皮肤屏障受损的皮肤病的发生发展之间的关系提供重要实验工具。现报道如下。
1材料与方法
1.1实验材料
1.1.1实验试剂MC903；真菌荧光染色液；电镜固定液。
1.1.2动物及菌株18只SPF级雄性BALB/c73小鼠固定器，7～8周，体重18～20g，购自斯贝福(北京)生物技术有限公司[动物生产许可证号：SCxK(京)2016-0002]。小鼠饲养于华南农业大学动物实验动物中心SPF级动物房[实验单位使用许可证编号：SYxK(粤)2019-0136]。
实验前小鼠均进行一周适应性饲养。所有动物实验操作过程均经华南农业大学实验动物伦理审查并批准(编号：2019-0121)。实验所用球形马拉色菌临床菌株分离自我院皮肤科门诊l例花斑糠疹患者，经真菌形态学和分子生物学测序鉴定。
1.2实验方法
1.2.1马拉色菌悬液制备将球形马拉色菌临床菌株接种于改良添加菜籽油的马拉色菌固体培养基中，31℃培养3～5天后分别将菌落挑人0.9％生理盐水和橄榄油内，微板分光光度仪调整菌悬液光密度为2ODA600/100肌。
1.2.2建模和实验分组18只小鼠随机分为6组：对照组、AD组、生理盐水菌悬液涂布正常小鼠组(Ns/M组)、生理盐水菌悬液涂布AD小鼠组(AD+Ns/M组)、橄榄油菌悬液涂布正常小鼠组(O渺M组)和橄榄油菌悬液涂布AD小鼠固定器(AD+oiL/M组)，每组3只。
分别将2nmolMC903溶液均匀涂抹于AD组、AD+Ns/M组、AD+O肜M组小鼠双侧耳皮肤，连续7天，此后每两天涂抹2nmolMC903溶液一次以维持AD模型。于第8天对NS/M组和AD+NS/M组小鼠分别加涂50L生理盐水菌悬液，0il/M组和AD+Oil/M组小鼠固定器分别加涂50“L橄榄油菌悬液，连续7天。对照组不予任何处理。
1.2.3小鼠临床表现观察于第O、4、8、10、15天分别测量小鼠体重、耳部厚度、记录小鼠固定器搔抓行为次数和对小鼠耳部皮损进行评分。根据症状分为红斑/充血、水肿、鳞屑/干燥、抓痕/脱皮4个项目，每项根据症状的轻重程度评为O～3分(0：无症状；1：轻度；2：中度；3：严重)。
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