小动物手术刀片在临床实验上的应用
来源：未知 |发布时间：2021-03-06 09:49|点击:次
骨折术后疼痛是一种临床常见急性疼痛,不仅患者感受痛苦,剧痛还能引起生理功能紊乱.甚至休克。因此,骨折后如何能够快速.充分控制疼痛,提高患者的生活质量成了骨科学—大研究重点。
右美托咪定作为临床麻醉中常用的一种药物,是一种新型高效高选择性的a2肾上腺受体激动剂、具有镇静、镇痛和抗交感作用,抑制机体术后应激反应和炎症反应,不抑制呼吸功能。目前,主要用于手术的全身麻醉辅助用药及重症监护病房患者的镇痛。小动物手术刀片。
动物实验研究表明,右美托球定具有一定的镇痛作用,研究发现在切口疼、急性疼痛以及慢性神经病理模型大鼠中应用右美托咏定后,大鼠疼痛行为学指标均可不同程度的降低,并且在一定范围内呈剂量依赖性,但对骨折大鼠的行为影响及作用机制尚不清楚。
本研究拟对研究常用的股骨中段闭合骨折模型大鼠进行鞘内注射右美托咪定后,通过对SD 大鼠状态.累积评分.运动功能评分,机械性缩足反应阈值.热缩足反射潜伏期.骨折大体愈合情况等进行观察评价,确定鞘内注射右美托咪定对骨折术后行为能力的影响及作用机制,现报道如下。
1、材料与方法
1.1实验动物选取健康雄性SPF级SD大鼠,添重300 -350 g。分笼饲养,保持环境干燥,室温控制在20 - 25℃之间,相对湿度控制在55% -65%,实验大鼠由其自由饮食及饮水,器具和垫料每天更换。
1.2分组正常对照组(c组,n = 25)未做任何处理。团合骨折模型建模后,将建模成功的大鼠随机选取50只分为两组,每组25只,观察组每天采用鞘内注射右美托咪定(2 ug/ kg)进行干预,模型组采用生理盐水进行干预。
1.3主要试剂和佼器右美托咪定;戊巴比妥纳:七氟醚由,青霉素钠;利多卡因;多聚甲醛;大鼠肿瘤坏死因子(TNF -a),白介素6(IL-6)和白介素10( IL-10)酶联免疫吸附测定试剂盒;和von Frey纤维丝;热痛刺激仪(型号:BME-410C);石蜡切片机;外科手术器械，小鼠开口器，小动物手术刀片。
1.4建立骨折模型用l%戊巴比妥钠( 40mg/ kg)行腹腔麻醉后,取右下肢戳骨内缘纵行切口,长约l cm,纵行分离部分股四头肌腱性组织。缓慢屈曲膝关节,将髋骨牵向外侧脱位,暴露股骨髀间凹。用手钻在股骨繇间凹处递行髓腔钻人克氏针(直径1.O mm),遇到股骨大转子阻力,稍回抽.切断,将断段埋于膝关节软骨表面下,逐层闭客前荐。大鼠仰卧,将右下肢外展内旋固定于造模支架的调节砧上(铁砧间距l5 mm) ,将造模支架中柱下端的骨刀压于大腿中部,助手提起500 g的砝码至20 cm处,让其沿导杆自由落体撞击钢板,致股骨中段骨折。采用X线对骨折模型成模进行检查。
1.5鞘内置管模型制备选择骨折模型建模成功的大鼠进行鞘内置管给药,所有建模成功的大鼠,在建模后2 h内吸人1.4%七氟醚麻醉后,呈俯卧位摆放固定,将背部备皮,消毒。于大鼠后枕部正中线找到L-L的间隙纵行切开,依次切开皮肤,皮下筋膜,钝性分离肌层后,暴露出白色椎板,找到两关节突结合处内侧,用导管尖端向头侧方向小心置入。若观察到导管内有脑脊液流出即表明置管成功,导管置人得深人约为l.6 - 1. 9cm,置好后将导管固定,并依次缝合切口。大鼠术后腹腔注射40万U青霉素钠预防感染。小动物手术刀片。
待大鼠麻醉失效后,经导管在大鼠鞘内注入2%利多卡因20pul,若出现甩尾反射,并出现双后肢麻痹,则模型建立成功。如果鞘内注射给药后大鼠出现行走及移动障碍则舍去不用,另外补充造模。
1.6观察指标
1.6.1大体观察在手术前,给药后1c3 d ,5 d.7 d 、l4d时观察大鼠骨折部位创面状态(如创面红肿.创面分泌物多少等),大鼠精神状态.饮食状况等,若大鼠创面部位出现感染情况,可适当使用抗生素处理。
1.6.2行为能力评价在手术前、给药后ld.3 d ,5 d、7 d ,l4d时评价天鼠一般行为能力,一般行为能力评价采用累积评分法和运动功能评分进行。
累积评分法的具体方法为:根据大鼠的后爪着地和浮肿水平进行积分,其中,后爪压迫变白代表负重，采取0-2计分法,后爪着地且负重,计·分;后爪着地但不可负重,计1分;后爪不着地且不负重,计2分。每5分钟观察评价一次,以l分钟内最常采取的姿势为标准,共观察Ⅰ小时,最后以术侧足评分减去对侧足评分为累积疼痛评分(共积分0-24分)。
采用1997年Hwang 的方法进行运动功能评分:0分为运动功能无改变,可以正常行走;l分为运动轻度受限,足底刺激可出现正常缩爪反应;2分为自主运动能力降低,中度运动受限,虽可正常行走,但足底刺激缩爪反应减弱;3分为自主活动完全受限,无法行走,出现明显的拖爪现象,足底刺激无反应。小动物手术刀片。
1.6.3急性疼痛行为评测在手术前.给药后ld ,3d .5 d,7 d ,l4d时测定大鼠右足急性疼痛行为学指标,即机械性缩足反应阈值（ mechanicallwithcrwalthreasholdl , MWT)和热缩足潜伏期(themamal withlrawallatency , TwL)。
1.6.3.1 MWT的测定将实验大鼠放置在金属网格网( 1.o cm xl.0 em)上并盖上透明有机玻璃罩适应30muin ,然后在下方用不同折力的Von Frey纤维丝(力度依次为1.6 g,2.0 g,4.0 g,6.0 g.8.o g、l0.0 g15.0 g、25.0 g.45.0 g 和60.0 g）垂直刺激大鼠右后爪足底中部,不断加大刺激力度,刺激后,若大鼠右后爪出现快速抬腿,缩足,逃避或舔足等行为反应时即为阳性反应,否则为阴性反应。每个力度反复刺激5次,每次间隔时间为l minm,将出现3 次及3次以上阳性反应的最小刺激力度计为机械性缩足反应阈值。
l.6.3.2TwL的测定把老鼠放置在有机玻璃箱中，将玻璃箱放置到玻璃板上适应30 min,然后采用热辐射刺激T器对大鼠右后爪足底中部进行照射,从开始照射计时,至大鼠表现出快速抬腿,缩足或回避反应截止,记录光照的时间。热刺激基础强度设定10 s,自动切断时间设定为25 s,每只大鼠分测5次,间隔时问为5 min,取5次平均值作为热缩足反射潜伏期。小动物手术刀片。
1.6.4骨折部位大体观察于给药后ld ,3 d ,5 d ,7d ,14d各时间点观察每组各取5只大鼠,处死后,别除造模部位肌肉组织,取股骨全长标本观察。
l.6.5炎性因子检测给药14d后,将各组剩余20只大鼠麻醉后断颈法处死,经腹腔动脉动脉采集血样,置于-8O℃冰箱保存,然后,酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF - a).白介素6(IL-6)和白介素I0(IL-10)的含量,具体操作步骤参考ELISA试剂盒说明书。
1.7统计学方法采用SPSS 20.0统计学软件对数据进行统计学分析,计量资料采用均数±标准差( x 主 s )表示,方差检验齐性后,组间计量资料比较为单因素方差分析,组内前后比较为配对:检验,若P<0.05,则差异具有统计学意义。小动物手术刀片。
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