实验大鼠固定架的售价贵吗
来源：未知 |发布时间：2021-11-17 16:58|点击:次
建模方法
所述模型的建立方法,按如下步骤操作:
(1)注射雌激素:所有实验小鼠(包括供体鼠和受体鼠)颈背部皮下注射苯甲酸雌二醇溶液150μg/kg,每4天注射1次,共注射两次。
(2)从注射雌激素开始至腹腔种植当日,每日定时对供体鼠和受体鼠进行阴道脱落细胞涂片检查,观察小鼠动情周期。动情周期判断依据如下:动情前期:圆形或椭圆形的有核上皮细胞为主,夹有少量角化细胞和白细胞;动情期:几乎全是无核的角化细胞;动情后期:角化细胞减少,出现有核上皮细胞和白细胞;动情间期:细胞少而皱缩,白细胞为主。
(3)种植前标本准备:供体小鼠的子宫取出用预冷的生理盐水清洗血液和粘液,将子宫一分为二分别放入盛有0.5mL预冷的RPMI1640培养基的培养皿中,用眼科剪将子宫纵向剖开,剥离子宫内膜层并迅速将其剪成体积≤1mm
3的内膜碎片制成悬浮液备用。
(4)腹腔注射内膜:受体小鼠腹部皮肤消毒后,以1mL注射器针筒接20mL注射器针头,以小鼠下腹部正中尿道口上方0.5cm处为进针点,将子宫内膜碎片注射入受体小鼠腹腔,针孔处涂抹适量青霉素软膏预防感染,供体鼠与受体鼠数量比为1∶2。
从取出供体小鼠子宫到注射子宫内膜碎片入受体小鼠所有操作应在5min内连续完成,全程保持无菌。假手术组注射雌激素的方法与模型组相同,不同的是,假手术组腹腔注射的是等体积的供体小鼠的腹腔脂肪组织。
(5)种植后处理:腹腔种植内膜当日开始对受体小鼠颈背部皮下注射苯甲酸β-雌二醇溶液150μg/kg,每4天注射1次,共注射两次,之后待内膜自然生长。
1.2.4观察指标和检测方法
分别于造模后第1周末、第2周末、第4周末、第6周末脱颈法随机处死模型组小鼠和假手术组小鼠各8只,经75%乙醇消毒后以2mL预冷的生理盐水注入小鼠腹腔,腹部充分按摩后收集腹腔灌洗液,取出腹腔种植物,从以下方面观察和检测相应指标。
(1)观察种植物形态:开腹后观察小鼠腹腔种
植物的生长部位、形态、颜色、体积等。之后放入4%多聚甲醛溶液,室温固定24h后常规石蜡包埋切片做HE染色,观察种植物病理组织形态学特征。
(2)测量种植物体积:种植物取出后用游标卡尺测量其长度、宽度与高度,按公式V=Π/6×长×宽×高[7],计算种植物体积。
(3)腹腔粘连评分:采用Blauer粘连评分系统对小鼠腹腔粘连程度进行评分。评分标准:0分,无粘连;1分,盆腔轻微的膜状粘连;2分,粘连致密,通常宫角与肠管和膀胱均有粘连;3分,粘连更致密,范围更广,双侧宫角均与肠管和膀胱粘连,子宫尚有一定活动度;4分,严重的粘连,双侧宫角均与肠管和膀胱粘连,子宫固定不动。粘连评分由两位实验人员独立进行,取两位实验人员所评分数的平均值作为最终粘连评分。
(4)TGF-β1表达水平:2mL离心管收集模型组小鼠腹腔灌洗液,4℃,2000rpm,离心15min,留取上清,-80℃冰箱保存。ELISA试剂盒检测小鼠腹腔灌洗液TGF-β1表达水平。
(5)Masson染色:常规石蜡包埋、切片、脱蜡,Masson三色染色液浸泡15~20min;常规梯度乙醇脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。显微镜下观察种植物胶原纤维沉积情况,评估种植物胶原沉积程度。
(6)免疫组化:常规石蜡包埋、切片、脱蜡,抗体孵育、封片。纤维化相关蛋白抗体E-cadherin(1∶400)、CollagenI(1∶200)、α-SMA(1∶200)、SMMHCII(1∶300)的表达情况,评估种植物纤维化情况。显微镜下观察免疫组化染色切片,染色区域内显示为黄棕色或黄褐色为阳性表达,每张切片高倍镜下拍摄三个不同视野,将采集的所有图像应用ImageproPlus6.0图像分析软件进行分析,计算每张图像上阳性表达区域的累积光密度(sumIOD),再测量对应阳性表达区域的面积(areaofinterest,AOI),以平均光密度(meanIOD)值作为该图像阳性表达的定量标准,反映图像上免疫反应物的表达强度。平均光密度(meanIOD)=累积光密度(sumIOD)/阳性区域面积(AOI)。每个样品拍摄的三张图像分析的平均光密度(meanIOD)再作一次平均,作为这个样品的平均光密度(meanIOD)。针对每个样本的平均光密度(meanIOD)值,用t检验或单因素方差分析比较各组蛋白表达量的统计学差异。
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